admin / 01.09.2020

Вакцина против лептоспироза инструкция

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И

а ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ‘ <£>

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

Всероссийский государственный научно исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ)

На правах рукописи УДК 619:616:98:579:834.1151:615.372

Сусский Евгений Владимирович

Вакцина против лепшоспироза животных концентрированная

(изготовление, контроль и применение).

16.00.03 — Ветеринарная микробиология,вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Москва 1997 г.

Работа выполнена на Армавирской биофабрике I во Всероссийском государственном научно исследовательском институте контроля, стандартизацш и сертификации ветеринарных препаратов.

Научный руководитель: — доктор ветеринарных наук,

профессор, Заслуженный деятель науки РСФСР Ю. А. Малахов

Оппоненты: — заведующая центром референции

по лептоспирозу ВОЗ, доктор медицинских наук Ю. В. Ананьина — кандидат биологических наук, доцент

И. А. Логинов

Ведущэе учреждение:

— Всероссийский научно -исследовательский и технологический институт биологической промышленности (г. Щелково).

Зйията диссертации состоится 1997 г

в -^^¿асов на заседании Диссертационного Совета Д 120:85:01- при Всероссийском государственном научно • исследовательском институте контроля, стандартизаци! и сертификации ветеринарных препаратов (123022, г Москва, Звенигородское шоссе,5, ВГНКИ)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ.

Автореферат

разослан » » ^¿¿¿¿Л 1997 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Ю УЪ/. Козыре:

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Успешное развитие животноводства невозможно без ветеринарных мероприятий, обеспечивающих профилактику и ликвидацию инфекционных болезней животных, в том числе лептоспироза.

Лептоспироз является одним из широко распространённых зоонозов. Болезнь регистрируют у домашних и диких животных различных видов, а также у людей на пяти континентах.

В основе борьбы с лептоспирозом животных помимо лабораторной диагностики и других ветеринарных мероприятий лежит вакцинопрофилактика. Вакцинация профилактирует клинические проявления лептоспироза, включая аборты лептоспирозной этиологии, массовое перезаражение животных, лептоспироноси-тельство, исключает формирование интенсивного очага лептоспироза.

В России — для профилактики лептоспироза широко-пртгеняют поливалентную вакцину «ВГНКИ» против лептоспироза животных, ассоциированную вакцину против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней, ассоциированную вакцину против лептоспироза и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, гексаканивак — ассоциированную вакцину против лептоспироза и вирусных болезней собак, внедряется вакцина против лептоспироза лиофилизированная.

Однако проблемы совершенствования технологии изготовления вакцин их стандартизация, повышение

иммуногенности, остаются актуальными.

Цель и задали исследований.

Целью наших исследований была разработк промышленной технологии изготовления вакцин концентрированной против лептоспироза животных, способ её изготовления, методов контроля, рационально схемы применения и оптимального режима хранения.

Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи

1. Разработать метод концентрирования лептоспир

2. Разработать промышленную технологию изготовлени концентрированной вакцины.

3. Стандартизировать вакцину по концентраци лептоспирозных антигенов.

4. Провести сравнительную оценку иммуногенной активности применяемой поливалентной и предлагаемо концентрированной вакцины против лептоспироза животных

5. Разработать оптимальную схему иммунизаци животных различных видов концентрированной вакциной

6. Разработать нормативную документацию на изго товление, контроль и применение концентрированно вакцины.

7. Внедрить разработанную промышленную технологи изготовления вакцины концентрированной проти лептоспироза животных на биопредприятиях.

Научная новизна

Создана концентрированная вакцина против лептоспиро за животных (Патент №2030915 с приоритетом от 31октябр 1990 г.)

Разработан метод концентрирования культур лептоспир путём ультрафильтрации на полых волокнах 2-30 и более раз, при этом накопление лептоспи превышает 2 млрд. микробных клеток в 1 см

питательной среды.

Установлено, что сконцентрированная на полых волокнах бактериальная масса лептоспир полностью сохраняет свою иммуногенность.

Установлен коэффициент лизиса при определении количества микробных клеток в концентрированной бактериальной массе лептоспир.

Стандартизирована иммуногенность вакцины по степени концентрации лептоспирозных антигенов.

Установлена иммуногенность концентрированной вакцины для лабораторных и сельскохозяйственных животных различных видов.

Практическая значимость.

Разработана нормативная документация на изготовление, контроль и применение концентрированной вакцины против лептоспироза животных.

Промышленная технология изготовления вакцины внедрена на Армавирской и Ставропольской биофабриках.

Концентрирование лептоспир методом ультрафильтрации позволяет использовать культуры лептоспир с любым накоплением.

Вакцина концентрированная против лептоспироза животных, в отличии от поливалентной вакцины ВГНКИ, вводится в 4-5 раз меньших объёмах и обеспечивает формирование иммунитета большей напряжённости и лродолжительности.

Апробация

Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку:

— на научно — практических конференциях и НТС Армавирской биофабрики (1991, 1994);

— на научной конференции межвузовского НПО «Биомедицинские технологии» (Москва, 1996);

— на научной конференции Краснодарской НИВ1

(1996) ;

— на межлабораторном совещании научных сотруднико: ВГНКИ ветпрепаратов Департамента ветеринарии Р<

(1997).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 3 статы и получен патент № 2030915 с приоритетом от 3! октября 1990 г.

Структура и объём диссертации.

Диссертация изложена на 124 страница: машинописного текста и включает: введение, обзо| литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 5 рисунками.

Список литературы включает 283 источника, и: них 116 зарубежных авторов.

Материалы и методы исследований

Работа проведена в 1991 — 199 6 гг. на Армавирской биофабрике и в лаборатории контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов против сальмонеллёза, лептоспироза и эшерихиоза ВГНКИ. Работа по концентрированию лептоспир выполнена нг Армавирской и Ставропольской биофабриках совместнс с Ситьковым В. И., Сурмило А. П., Ярцевым С. Н.

Исследования по определению оптимальны* иммунизирующих доз вакцины проводили в хозяйства* Курской и Белгородской областей, а также на свинопоголовье Армавирской биофабрики.

В работе использовали диагностические штаммь лептоспир 15 серогрупп, вакцинные штаммы лептоспир шести серогрупп 6г1рро1урЬоза ( ВГНКИ-1 ),

Icterohaemorrhagiae(ВГНКИ-2) ,Canicola (ВГНКИ-З) , Tarassovi (ВГНКИ-4),Pomona (ВГНКИ-6), Sejro (Hardjo).

Питательные среды: сывороточная среда ВГНКИ на фосфатном буфере; среда с овечьим альбумином, солевым компонентом и фактором роста — среда ГНКИ; бульон и агар Хоттингера, МПА, МПВ, среды Китт — Тароцци и Сабуро.

Растворы, реактивы, химические вещества: трихлоруксусная кислота; однозамещённый фосфорнокислый калий; двузамещённый фосфорнокислый натрий; хлористый натрий; раствор аммиака; едкий натрий; мертиолят; формалин; перекись водорода, гидроокись алюминия; соляная кислота; вода деминерализованная.

Лабораторные и сельскохозяйственные животные: кролики порода шиншила массой 3,0 — 3,5 кг — 700 голов; золотистые хомячки массой 40 — 50 г — 1100 голов; белые мыши массой 15 — 13 г — 340 голов; морские свинки массой 350 — 4 00 г — 256 голов; овцы массой не менее 40 кг — 1500 голов; подсвинки возрастом 2,5-3 мес. — 150 голов; телята возрастом 5-6 мес — 120 кг — 120 голов, свиньи и крупный рогатый скот разных возрастных групп.

Штаммы лептоспир пересевали каждые 10 дней. Лептоспиры культивировали на сывороточной среде при температуре 28°С в течение 5-7 дней. Наличие роста определяли просмотром пробирок в

проходящем свете и микроскопией капель культур — в тёмном поле микроскопа. Чистоту культур проверял* высевом на МПБ, МПА, МППБ и среду Сабуро, а также просмотром культур в проходящем свете и микроскопией.

Серогрупповую принадлежность штаммов лептоспир контролировали в перекрестной РМА с групповыми агглютинирующими лептоспирозными сыворотками согласно «Методических указаний по лабораторной диагностике лептоспироза животных» (1976) и Стандарту Союза ССЕ «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза» (1992).

Иммуногенную активность концентрированной вакцинн против лептоспироза изучили на крупном рогатое скоте, свиньях разных возрастных групп, которых иммунизировали разными дозами вакцины.

Определение титра антител в сыворотке крови исследуемых животных проводили согласно того же стандарта.

Превентивные свойства сыворотки крови исследовали на золотистых хомячках, используя по 10 зверьков в группе. Хомячкам внутримышечно вводили по 0.5 см3 сыворотки и через 2 часа заражали смертельной дозой лептоспир (ЮЬО50) . Обязательным условием опытов был 100% — ный падёж заражённых хомячков в контрольных группах.

Разработка метода концентрирования

антигенов лептоспир.

Скудный рост лептоспир в сывороточных питательных средах обязывает вводить существующие вакцинные препараты для формирования иммунитета достаточной напряжённости в больших дозах (до 10 см3) , в этой связи мы сделали попытку концентрировать культуру лептоспир тремя разными методами.

Первый из них — традиционный метод, который используется для получения поливалентной вакцины ВГНКИ, заключается в добавлении к культуре лептоспир до 3%-ной концентрации трихлоруксусной кислоты,

отстаиванием в течение 3-4 часов, с последующим удалением 60%-тов надосадочной жидкости и растворением осадка аммиаком. Данный метод мы использовали в качестве контроля.

Второй метод заключается в добавлении 4 0% -ного раствора ПЭГ и 15 %-ного раствора хлорида натрия с последующим центрифугированием. Использование этого метода мы признали нерациональным и в дальнейшей работе не использовали, так как методика получения 40%-ного раствора ПЭГ является трудоёмкой, сам метод требует добавления электролита и центрифугирования для отделения осадка.

Третий метод заключается в концентрировании лептоспир путём ультрафильтрации на полых волокнах на установке УПВ -б. Промышленная ультрафильтрационная установка на полых волокнах предназначена для проведения работ по ультрафильтрации с целью разделения, концентрирования высокомолекулярных соединений с помощью полупроницаемых мембран в виде полого волокна из ароматического полиамида.

Метод ультрафильтрации позволяет получить культуру лептоспир, сконцентрированную от 2 до 30 и более раз, при этом накопление лептоспир может превышать 2 млрд. микробных клеток в 1 см3 питательной среды.

Подача культуры лептоспир в установку осуществляется насосами, бактериальная масса циркулирует по замкнутому контуру ( из ёмкости исходного реактора) через разделительные колонки в ёмкость исходного реактора, до достижения требуемой концентрации лептоспир.

Для определения концентрации мы подсчитываем количество микробных клеток в бактериальной массе, сгущенной в 5, 10, 15 и 20 раз. Подсчёт количества лептоспир в 1 смЗ питательной среды проводили в исходной смеси культур до начала и

в процессе концентрирования.

Изготовлено 6 серий антигенов лептоспир серогруп! Pomona, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae, Canicola и серий из лептоспир Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa Sejroe. Результаты работы представлены в таблице 1

Таблица

Количество лептоспир в культуре в зависимости от степени концентрации

Содержание лептоспир в культуре сконцентрированной в

Вари- ИСХОД

ант ное 5 раз 10 раз 15 раз 20 раз

вак- накоп. эбна рас коэффи обна рас соэффи эбна рас :оэффи обна рас шэффу

цины лепто руже чёт циент руже чёт (иент руже чет циент руже чет циент

спир но ное лизиса но ное пизиса но ное лизиса но ное лизиса

I 65 130 325 2,5 220 650 3,0 4L0 975 2,4 550 1300 2,4

I 42 119 210 1,8 270 420 1,6 332 630 1,9 400 840 2,1

I 50 170 250 1,5 310 500 1,6 520 750 1,4 750 1000 1,3

I 28 160 190 1,2 271 380 1,4 302 570 1,9 334 760 2,3

55 210 275 1,3 340 550 1,6 570 825 1,5 780 1100 1,4

II 60 300 300 1,0 360 600 1,7 300 900 3,0 400 1200 3,0

60 — — — 368 600 1,6 606 900 1,5 750 120С 1,6

I 60 300 300 1,0 410 600 1,5 — — — 580 1200 2,1

62 217 310 1,4 362 620 1,7 495 930 1,9 751 1240 1,7

II 63 194 315 1,6 305 630 2,1 341 945 2,8 483 1260 2,6

65 125 325 2,6 341 650 2,8 483 126С 1,9 709 1300 1,8

II 70 163 350 2,2 267 700 2,6 336 105( 3,1 494 1400 2,8

II 55 100 275 2,8 203 550 2,7 . L54 825 3,3 — — —

II 55 108 275 2,6 204 550 2,7 «54 825 3,3 — — —

I 40 120 200 1,7 180 400 2,2 540 600 1,8 — — —

I 60 140 300 2,1 200 600 2,0 ПО 900 2,9 — — —

II 50 140 >50 1,8 230 500 2,2 : 150 750 2,1 — — —

II 55 150 >75 1,8 250 550 2,2 : S40 825 2,4 — — —

Коэффициент

лизиса 1,8 2,02 2,3 2,1

Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что количество микробных клеток в концентрированной бактериальной массе лептоспир не пропорционально кратности сгущения и видимое количество лептоспир меньше расчётного. В связи с этим вывели коэффицент между расчётным, и накоплением лептоспир в концентрированной культуре, который мы назвали коэффицентом лизиса.

Так, для культуры лептоспир, сконцентрированной в 5 раз составил 1,8; в 10 раз — 2,02; в 15 раз — 2,3; в 20 раз — 2,1.

По нашему мнению несоответствие между расчётным и действительным количеством лептоспир обусловлено лизисом значительного количества микробных клеток в процессе концентрирования и следовательно отсутствием возможности учесть их.

Для установления полноты осаждения лептоспир на полых волокнах проводили микроскопию фильтрата и кроме того, его вводили кроликам внутривенно трёхкратно в объёме 1, 2 и 3 см3 с интервалом 3 дня. В дальнейшем сыворотку кролика исследовали в РМА, результаты исследований отрицательные, то есть концентрирование на полых волокнах приводит к полному осаждению цельных и лизированных клеток лептоспир.

Определение степени концентрирования антигенов лептоспир.

Следующим этапом нашей работы была оценка необходимой оптимальной кратности концентрирования культуры лептоспир при производстве вакцины.

С этой целью из одной расплодки приготовлены вакцины двух вариантов с концентрацией лептоспир в 5, 10, 15 и 20 раз и в качестве контроля -вакцина, приготовленная традиционным методом.

Активность вакцин, проверяли на кроликах массой 3.0 — 3.5 кг, которых иммунизировали однократно внутривенно в дозе 50 млн. микробных

клеток. Сыворотку крови кроликов исследовали РМА через 25 дней после иммунизации. Результа1 работы приведены в таблице 2.

Таблица

Зависимость антигенной активности вакцины оз степени концентрирования лептоспир

Кратность :1азвдение Титр антител к лептоспирам

концешри Антигены Доза Серия №4 Серия №2 Доза Антигены Серия №3

рования в млн з шш

микробн ■шкробн

клеток клеток

Контроль ‘omona 1: 305 1: 2785 Pomona 1:2265

Tarassovi 50 1: 1395 1: 3200 50 Tarassovi 1:4525

Icterohaemorrhagiae I: 490 1:800 Grippotyphosa 1:50

Canícola 1: 690 1: 800 Sejroe 1:565

Средний 1:720 1: 1896 Средний 1:1851

Pomona 1: ИЗО 1:12800 Pomona 1:1970

5 1:5 Tarassovi 50 1:1395 1:12800 50 Tarassovi 1:2785

Icterohaemorrhagiae 1:1300 1:18100 Grippotyphosi 1:565

Canicola 1:1130 1:13100 Sejroe 1:350

Средний 1:1239 1:14200 Средний 1:1418

Pomona 1:1130 1:800 Pomona 1:2110

10 1:10 Tarassovi 50 1:2785 1:6400 50 Tarassovi 1:1970

Icterohaemorrhagiae 1:2110 1:12800 Grippotyphosa 1:360

Canicola 1:1300 1:3400 Sejroe 1:400

Средний 1:1831 1:6600 Средний 1:1228

Pomona 1:2425 1:1970 Pomona 1:1130

15 1:15 Tarassovi 50 1:1600 1:12800 50 Tarassovi 1:1840

Icterohaemorrhagiae 1:1600 1:3940 Grippotyphosi 1:350

Canicola 1:1600 1:1600 Sejroe 1:400

Средний 1:1800 1:5078 Средний 1:1875

Pomona 1:1055 1:3200 Pomona 1:600

20 1:20 Tarassovi 50 1:600 1:6400 50 Tarassovi 1:350

icterohaemorrhagiae 1:800 1:6400 Grippotyphosa 1:85

Canicola 1:800 1:1600 Sejroe 1:80

Средний 1:1064 1:4400 Средний 1:303

Результаты контроля показывают, что методе ультрафильтрации на полых .волокнах, позволяет получи1] полноценную в антигенном отношении культуру лептост независимо от кратности сгущения.

Для практического применения мы остановились I 10-ти кратном сгущении культуры лептосп^ руководствуясь тем, что уменьшение кратности

концентрирования обязывает увеличивать дозы вакцины, а повышение кратности концентрирования создаёт неудобства при вакцинации молодняка, которому вакцину пришлось бы вводить в десятых долях см3.

Разработка метода контроля активности вакцины концентрированной против лептоспироза

В качестве базового мы использовали метод, применяемый для контроля активности поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных (Ю. А. Малахов,Г.Л.Соболева, А. П.Самохвалов,В. С.Соловьёва ) —

Лабораторной моделью при контроле активности вакцины служили взрослые кролики массой 3,0 — 3,5 кг, не содержащих специфических антител к лептоспирам.

Вакцины с разной степенью концентрации антигенов разводили до исходной концентрации и проверяли по активности в опыте на кроликах. Кроликам вводили вакцину первого и второго вариантов, внутривенно в дозе — 50 млн./см3 микробных клеток. Через 25 дней брали кровь и сыворотку исследовали в РМА на наличие специфических антител. В опыте использованы три серии вакцины. Установили, что титр антител в сыворотке крови кроликов колебался от 1:800 до 1:12800.

Аналогичным образом проверена активность 5 опытно — промышленных серий концентрированной вакцины, изготовленной на Армавирской и

Ставропольской биофабриках

Результаты контроля приведены в таблице 3.

Таблица

Результаты контроля активности опытнопромышленнь серий концентрированной вакцины против лептоспироза животных

Изготовитель № серии Средний титр антител к лептоспироза,м

Ротопа Тагашт ШегоЬае-morrhagiae Спрро1у-рИоэа 8е]гое Средние данные

Ставропольская биофабрика 1 2 3 1 :2000 1 : 2600 1 :1680 1:2400 1 :1600 1:2400 1 : 2800 1:900 1 : 1375 1 :466 1 : 2400 1 : 1700 1 : 1480

Армавирская биофабрика 1 1 1: 1920 1:3840 1 :1600 1:2560 : 1440 1:2560 1 :1280 1:1653 1 :2560

Средние данные 1 :2408 1 :2112 1 : 1713 1 : 1968 1 : 873 1 : 1959

Данные, приведённые в таблице свидетельствук о том, что концентрированная вакцина являете высокоактивным препаратом и вызывает формирована антител у кроликов при однократном внутривеннс введении в титре от 1:800 до 1:2400, что значителы-превышает титры при контроле поливалентной вакцин ВГНКИ против лептоспироза животных.

Определение иммунизирующих доз вакцины, напряжённости и продолжительности иммунитета у крупного рогатого скота и свиней.

Крупный рогатый скот разных возрастных труп вакцинировали в совхозах «Разуменский» Белгородскс области и «Железногорский» Курской области.

Напряжённость иммунитета изучали у крупног рогатого скота, вакцинированного разными дозаь: концентрированной вакцины, по титру антител и п превентивной активности сыворотки крови вакцинировании

животных для золотистых хомячков. Сыворотку крови животных исследован в РМА на наличие титра антител и по превентивной активности до вакцинации и через 10, 20, 30, 60, 90, 120, 150, 180 дней после вакцинации.

Результаты работы приведены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4

Титр антител в сыворотке крови крупного рогатого скота после вакцинации концентрированной и коммерческой (контроль)

вакциной

Возраст животного Доза вакц. смЗ Титр антител в сыворотке крови животных на день исследования

10 20 30 60 90 120 180

1,5-6 мес 0,5 1:75 1:150 1:250 1: 100 1:70 1:40 1:20

контроль 1:50 1:100 1:200 1:100 1:50 1:20 1:10

6-12 мес 0,5 1:75 1:160 1:300 1:100 1:80 1:50 1:10

контроль 1:55 1:150 1:250 1:80 1:80 1:40 1:10

1 — 2 года 1,0 1:80 1:230 1:285 1:160 1:80 1:50 1:25

контроль 1:75 1:160 1:200 1:100 1:70 1:30 1:15

Таблица

Превентивная активность сыворотки крови крупного рогатого скота, вакцинированного концентрированной вакциной против лептоспироза

Возраст животных (месяцы) Доза вакцины (см3) Превентивная активность сыворотки крови крупного рогатого скота для хомячков по дням (% защиты)

10 20 30 60 90 120 180

1.5-6 0.5 20 70 80 90 100 90 70

6- 12 0.5 20 20 80 100 100 90 60

12-18 1.0 30 40 90 100 100 90 100

взрослые 1.5 20 50 60 90 90 100 90

Из материалов таблицы 4 видно, что крупны) рогатый скот различных возрастных групп от 1,5 ме< до 2 лет на введение вакцины отвечает образование! антител примерно в таких же титрах, что и н; введение контрольной вакцины. Антитела выявляются н; 10 день в титре 1:50 — 1:80, достигают максимальное уровня на 30 день — 1:200 — 1:300, а через 120 дне* титр составляет 1:20 — 1:150; а через 180 дней 1:10 — 1:20.

Превентивная активность сыворотки крови выявляете; не зависимо от дозы вакцины 0,5 — 1,5 см3 у все: возрастных групп животных. Сыворотка крови на 1( день после вакцинации предохраняет от гибели 20 -30%, хомячков через 20 дней — 20 — 70% хомячков, через 30 дней — 60- 90% хомячков, на 60 — 120 деш — 90 — 100% хомячков, через 180 дней превентивна? активность начинает ослабевать.

Аналогичные результаты получены при вакцинации

. и-

подсвинков и свиней.

Опытно — промышленную серию концентрированной вакцины первого варианта изготовили на Армавирской биофабрике. Дозами от 0,5 до 2,0 см3 вакцины концентрированной вакцинировали внутримышечно 48 подсвинков массой 50 — 60 кг.

Сыворотка крови поросят до вакцинации не содержала специфических антител к лептоспирам, выявленных в РМА и не защищала от гибели хомячков, заражённых вирулентной культурой лептоспир.

В динамике у животных брали кровь, определяли титр антител в PMA. ^

Результаты работы показаны в таблицах 6 и 7.

Из данных таблицы следует, что все подсвинки отвечают образованием антител на введение концентрированной вакцины, однако о наличии иммунитета можно судить только по превентивной активности сыворотки вакцинированных животных. Так установлено, что доза концентрированной вакцины 0,5 см3 не вызывает формирование иммунитета достаточной напряжённости. Доза в 1,0 см3 вызывает не полный иммунный ответ, но иммунитет в данном случае достаточной напряжённости и продолжительности ( 90 дней срок наблюдения } . Дозы вакцины 1,5 и 2,0 см3 вызывают формирование иммунитета высокой напряжённости, превышающей таковой в контроле, то есть при введении обычной коммерческой вакцины в дозе 6,0 см3.

Таблиц

Агглютинирующая и превентивная активность сыворотки крови свиней, вакцинированных концентрированной вакциной против лептоспироза Армавирской биофабрике

ш Доза Штаммы Цо вакци- Титр антител по дням

груп вакц лептоспир tamm 15 20 25 30 40 50 60 90

пы (см1)

Pomona 1:16 1:11 1:14 1:10 1:20 1:25 1:14 1:14

Tarassovi 1:15 1:15 1:35 1:10 1:20 — 1:10 —

I 0,5 Icterohaemorrhagiae 1:12 1:53 1:57 1:98 1:35 1:35 1:20 1:13 1:10

Canicola 1:19 1:28 1:30 1:16 1:28 1:14 1:10 1:5

Общий титр 1:23 1:23 1:35 1:15 1:25 1:19 1:11 1:14

% выживания 20 30 30 20 30 30 30 20

Pomona 1:20 1:20 1:30 1:640 1:130 1:80 1:320 1:35

Tarassovi 1:15 1:35 1.70 1:12 1:14 1:10 1:15 1:13

II 1,0 Icterohaemorrhagiae 1:12 1:75 1:121 1:557 1:75 1:43 1:40 1:70 1:32

Canicola 1:14 1:30 1:30 1:40 1:12 1:14 1:20 1:10

Общий титр 1:25 1:40 1:75 1:75 1:32 1:26 1:53 1:20

% выживания 70 50 70 60 60 60 70 90

Pomona 1:25 1:49 1:320 1:970 1:171 1:61 1:92 1:80

Tarassovi 1:30 1:25 1:30 1:20 1:20 1:20 1:10 1:32

ш 1,5 Icterohaemorrhagiae 1:14 1:75 1:43 1:299 1:75 1:49 1:35 1:80 1:30

Canicola 1:26 1:30 1:40 1:35 1:28 1:10 1:14 1:10

Общий титр 1:35 1:46 1:106 1:86 1:46 1:21 1:43 1:37

% выживания 100 100 100 100 90 90 90 100

Pomona 1:25 1:92 U52i 1:139 1:27! 1:39* 1:160 1:28

Tarassovi 1:40 1:49 1:260 1:57 1:16 1:10 1:30 —

IV 2,0 Icterohaemorrhagiae 1:11 1:53 1:106 1:520 1:57 1:57 1:32 1:57 1:20

Canicola 1:46 1:49 1:57 1:16 1:17 1:13 1:10 1:12

Общий титр 1:40 1:70 1:260 1:53 1:46 1:37 1:40 1:19

% выживания 100 100 100 90 100 100 100 60

Pomona 1:37 1:61 1:394 1:53 1:226 1:36! 1:86 1:53

Tarassovi 1:40 1:30 1:113 1:10 1:17 1:26 1:17 1:12

V 6,0 Icterohaemorrhagiae 1:10 1:49 1:70 1:394 1:43 1:86 1:75 1:61 1:43

(конт- Canicola J:61 1:53 1:171 1:35 1:43 Л:61 1:40 1:20

роль) Общий титр 1:46 1:53 1:243 1:30 1:61 1:80 1:543 1:28

% выживания 80 80 90 80 не исследовали

-it’

та блица 7

Превентивная активность сыворотки крови свиней,вакцинированных концентрированной вакциной в совхозе «Железногорский»

Возраст животн. (месяцы) Доза вакцины (см3) Превентивная активность сыворотки крови свиней для золотистых хомячков по дням

0 10 20 30 60 90 120

1.5 0.5 0 0 30 70 70 60 40

3 0.5 0 20 40 70 80 80 50

свиноматки 1.0 10 60 100 100 100 100 80

Из данных таблицы 7 ‘следует, что сыворотка крови на 10 день после вакцинации предохраняет от гибели 20 — 60% хомячков, через 30 дней 70 — 100 % хомячков, а к 90 дню 60 — 100% хомячков, через 120 дней превентивная активность начинает ослабевать.

Из результатов видно, что для поросят 1.5-3 месячного возраста доза концентрированной вакцины 0.5 см3 создаёт иммунитет достаточной напряжённости. У свиноматок, вакцинированных вакциной в дозе 1.0 см3, иммунитет высокой напряжённости.

Таким образом, концентрированная вакцина является высокоактивным препаратом, обуславливающим формирование иммунитета.

Определение срока годности вакцины

Дальнейшим этапом нашей работы было определение срока годности вакцины.

Концентрированную вакцину против лептоспироза животных и поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза (контроль), предварительно проверенные

по антигеной активности на кроликах, хранил! при температуре 4°С, 18 — 22°С и 37°С.

Препараты по антигенной активности проверяли i опыте на кроликах массой 3,0-3,5 кг путёд однократного внутривенного введения. Кровь браль на 24-25 день и исследовали в РМА на наличие титра антител.

Режим хранения концентрированной вакцины npi 20°С и 37°С существенно не снижает активность вакцины в течении 6 месяцев хранения. Увеличение срока хранения препарата при этих режимах приводи1] к резкому снижению его активности.

Изучение срока годности вакцины показало, чтс при температуре бытового холодильник; концентрированная вакцина сохраняет свою активность до двух лет (срок наблюдения).

Технологическая схема производства концентрированной вакцины против лептоспироза

животных.

Технологическую схему производства концентрированной вакцины мы представляем следующим образом:

I этап. Приготовление питательной среды.

II этап. Приготовление матровых, производственны* расплодок и культивирование лептоспир.

III этап. Составление серии вакцины.

IV этап. Концентрирование антигенов лептоспир v цеховой контроль.

V этап. Контроль вакцины.

Таким образом, разработана концентрированная вакцина против лептоспироза животных, которая положительно зарекомендовала себя при лабораторных и практических испытаниях.

ВЫВОДЫ:

1. Разработан способ изготовления, контроля и применения вакцины концентрированной протиг

применения вакцины концентрированной против лептоспироза животных.

2. Предложенная технология обеспечивает повышение иммуногенности концентрированной вакцины, по сравнению, с коммерческой { поливалентная вакцина ВГНКИ) на 12-15 % за счёт исключения из технологического процесса трихлоруксусной кислоты и щёлочи, частично разрушающих антигены лептоспир.

3. Фильтрация культуры лептоспир через УПВ -б задерживает, как цельные, так и лизированные антигены лептоспир. Иммуногенность антигенов лептоспир в процессе фильтрации не изменяется, фильтрат не содержит следов антигенов лептоспир.

4. Концентрирование лептоспир путём ультрафильтрации сопровождается частичным их лизисом, что позволило нам вывести коэффициент лизиса лептоспир в процессе концентрирования. При определении концентрации, лептоспир сгущенных в 5 раз, коэффициент лизиса составляет 1,8; при концентрации в 10 раз — 2,02; при концентрации в 15 раз — 2,3.

5. Определены оптимальные иммунизирующие дозы препарата, напряжённость и продолжительность иммунитета у крупного рогатого скота и свиней. Иммунитет достаточной напряжённости и продолжительности формируется после однократного введения вакцины молодняку сельскохозяйственных животных в дозе 1,0 см3, взрослым животным — в дозе 2, 0 см3.

6. Вакцина концентрированная характеризуется высокой устойчивостью при хранении и не утрачивает иммуногенности при температуре 20°С и 37°С в течении б месяцев, при температуре 4°С более двух лет ( срок наблюдения).

Практические предложения

1. Изготавливать и применять в животноводстве вакцину концентрированную против лептоспироза животных в соответствии со следующей нормативной

— инструкцией по изготовлению и контролю вакцш концентрированной против лептоспироза животны; утверждённой Департаментом ветеринарии МСХ РФ от февраля 1994 г.;

техническими условиями ТУ 93 — 84 — 046 — 00′ -41-85-94 «Вакцина концентрированная прот! лептоспироза животных», утверждёнными Департаменте ветеринарии МСХ от 7 февраля 1994 г.;

наставлением по применению вакциь концентрированной против лептоспироза, утверждённо> Департаментом ветеринарии РФ от 22 июля 1996 г.

2. Использовать концентрированную вакцину дл вакцинации животных против лептоспироза вмес: поливалентной вакцины ВГНКИ, как более иммуногенну*

3. Для стандартизации концентрированной вакцин по иммуногенности проводить цеховой контроль учетом степени лизиса лептоспир в процесс концентрирования.

Список

работ опубликованных по теме диссертации:

Состав: Вакцина изготовлена из смеси биологически активных клонированных штаммов лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae, а по эпизоотическим показателям и серогруппы Canicola (I вариант – для иммунизации свиней); или из лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Sejroe (серовар Hardjo) (II вариант – для иммунизации крупного рогатого скота, овец и коз), инактивированных формальдегидом с добавлением в качестве адъюванта геля гидрата окиси алюминия.

Назначение: Вакцина предназначена для иммунизации сельскохозяйственных животных и пушных зверей клеточного содержания. Вакцину применяют в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах; а также в благополучных хозяйствах при комплектации поголовья без обследования на лептоспироз. Вакцинации подлежит крупный рогатый скот, верблюды, лошади, ослы и мулы в возрасте 1,5 месяцев и старше, животные других видов – от 1 месяца и старше. Лошадей, пушных зверей и животных других видов иммунизируют вакциной того варианта, в состав которого входят лептоспиры серогрупп, установленные у животных в данном хозяйстве или в данной местности. . Вакцина вызывает формирование иммунитета у сельскохозяйственных животных и пушных зверей к лептоспирозу через 14-20 дней после введения вакцины продолжительностью у телят, ягнят, свиней всех возрастных групп, молодняка пушных зверей – до 6 месяцев, у овец, коз и пушных зверей, вакцинированных в возрасте 6 мес. и старше, крупного рогатого скота и лошадей, привитых в возрасте 1 года и старше – до 12 месяцев. Продолжительность колострального иммунитета у поросят и ягнят сохраняется до 1,5 месяцев, у телят –2,5 месяца.

Применение: Вакцину вводят внутримышечно однократно (за исключением 1-3-х месячных поросят, которых иммунизируют двукратно с интервалом 12-15 дней с ревакцинацией через 3 месяца), в дозах указанных в инструкции.

Форма выпуска: Суспензия для инъекций. Вакцина расфасована по 100 см3 в стеклянные флаконы.

Условия хранения: Вакцину хранят и транспортируют в сухом темном месте при температуре от 2°С до 8°С. Допускается транспортировка вакцины при температуре до 25 °С в течение 15 суток.

Срок годности 18 месяцев.

Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Лептоспироз

УТВЕРЖДАЮ
Начальник Департамента
ветеринарии Министерства сельского
хозяйства и продовольствия
Российской Федерации — Главный
государственный ветеринарный
инспектор Российской Федерации
В.М.АВИЛОВ
от 18 июня 1996 г. N 23

УТВЕРЖДАЮ
Первый заместитель Председателя
Госкомсанэпиднадзора России —
Заместитель Главного
государственного санитарного врача
Российской Федерации
С.В.СЕМЕНОВ
от 31 мая 1996 г. N 11

3.1. Профилактика инфекционных болезней Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных 8. Лептоспироз Санитарные правилаСП 3.1.091-96 Ветеринарные правила ВП 13.3.1310-96

1. Разработаны:

  1. Научно — исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (Ананьина Ю.В., Евдокимова О.А., Петров Е.М., Самсонова А.П.);
  2. Всероссийским государственным научно — исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратов (Малахов Ю.А., Соболева Г.Л., Панин А.Н.);
  3. Центральным научно — исследовательским институтом эпидемиологии Госкомсанэпиднадзора РФ (Шумилов П.К.);
  4. Московской государственной академией прикладной биотехнологии (Логинов И.А.);
  5. Научно — исследовательским институтом ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (Усольцев В.М.);
  6. Всесоюзным НИ технологическим институтом биологической промышленности (Белоусов В.И.).

2. Утверждены и введены в действие Первым заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России от 31 мая 1996 г. N 11 и начальником Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 18 июня 1996 г. N 23.

3. Взамен методических рекомендаций «Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза» Минздрава РСФСР от 07.12.87 г. в части «Профилактика».

Закон РСФСР «О санитарно – эпидемиологическом благополучии населения»

«Санитарные правила, нормы и гигиенические нормативы (далее — санитарные правила) — нормативные акты, устанавливающие критерии безопасности и (или) безвредности для человека, факторов среды его обитания и требования к обеспечению благоприятных условий его жизнедеятельности.

Санитарные правила обязательны для соблюдения всеми государственными органами и общественными объединениями, предприятиями и иными хозяйствующими субъектами, организациями и учреждениями, независимо от их подчиненности и форм собственности, должностными лицами и гражданами» (статья 3).

«Санитарным правонарушением признается посягающее на права граждан и интересы общества противоправное, виновное (умышленное или неосторожное) деяние (действие или бездействие), связанное с несоблюдением санитарного законодательства РСФСР, в том числе действующих санитарных правил…

Должностные лица и граждане РСФСР, допустившие санитарное правонарушение, могут быть привлечены к дисциплинарной, административной и уголовной ответственности» (статья 27).

Закон РФ «О ветеринарии»

«Основными задачами ветеринарии в Российской Федерации являются: … контроль за соблюдением органами исполнительной власти и должностными лицами, предприятиями, учреждениями, организациями, … иностранными юридическими лицами, гражданами Российской Федерации, иностранными гражданами и лицами без гражданства — владельцами животных и продуктов животноводства (далее — предприятия, учреждения, организации и граждане) ветеринарного законодательства Российской Федерации» (статья 1).

«Ветеринарное законодательство Российской Федерации регулирует отношения в области ветеринарии в целях защиты животных от болезней, выпуска безопасных в ветеринарном отношении продуктов животноводства и защиты населения от болезней, общих для человека и животных» (статья 2).

«Должностные лица и граждане, виновные в нарушении ветеринарного законодательства Российской Федерации, несут дисциплинарную, административную, уголовную и иную ответственность в соответствии с настоящим Законом и другими актами законодательства Российской федерации» (статья 23).

Часть 1

Область применения

1.1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Российской Федерации государственными органами, предприятиями и иными хозяйственными субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.

Часть 2

Нормативные ссылки

2.1. Закон РСФСР «О санитарно — эпидемиологическом благополучии населения».

Примечание: Закон РСФСР от 19.04.1991 N 1034-1 утратил силу в связи с принятием Федерального закона от 30.03.1999 N 52-ФЗ.

2.2. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан.

2.3. Закон Российской Федерации «О ветеринарии».

2.4. Государственная система санитарно — эпидемиологического нормирования Российской Федерации.

2.5. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно — санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

2.6. Инструкция «Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства».

2.7. Инструкция по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.

2.8. Методические рекомендации «Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза». Минздрав РСФСР, 1987.

2.9. Методические указания по эпидемиологии и профилактике лептоспироза Минздрав, СССР, 1979.

2.10. Методические указания по борьбе с серой крысой в природных очагах иктерогеморрагического лептоспироза. Минздрав, 1984.

2.11. Инструкция о мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза. 1992.

2.12. Методические указания по лабораторной диагностике лептоспироза животных. 1976.

2.13. Государственный стандарт Союза СССР «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза». ГОСТ 25386-91.

2.14. Наставление по применению поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных. 1992.

2.15. Наставление по применению вакцины против лептоспироза животных(концентрированной). 1994.

2.16. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней. 1989.

2.17. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. 1986.

2.18. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота. 1991.

2.19. Наставление по применению вакцины против лептоспироза собак. 1994.

2.20. Наставление по применению вакцины лептоспирозной инактивированной жидкой. 1981.

2.21. Наставление по применению вакцины против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак (гексаканивак). 1991.

Часть 3

Общие сведения о лептоспирозе

Лептоспироз — зоонозная природноочаговая инфекционная болезнь диких, домашних животных и человека, широко распространенная в различных ландшафтно — географических зонах мира.

Источники возбудителей лептоспирозной инфекции подразделяются на две группы. К первой относятся грызуны и насекомоядные, являющиеся основными хозяевами (резервуаром) возбудителей в природе; ко второй — домашние животные (свиньи, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, собаки), а также пушные звери клеточного содержания (лисицы, песцы, нутрии), формирующие антропургические (сельскохозяйственные) очаги.

Возбудители лептоспироза — микроорганизмы рода Leptospira.

Патогенные лептоспиры представлены 202 сероварами, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серологические группы.

На территории Российской Федерации возбудителями лептоспироза сельскохозяйственных животных и собак являются лептоспиры серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Sejroe, Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae, Canicola; в природных очагах установлена циркуляция лептоспир серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Sejroe, Javanica, Icterohaemorrhagiae, Bataviae, Australis, Autumnalis. В этиологической структуре лептоспирозных заболеваний человека преобладают лептоспиры серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Sejroe.

Основной путь передачи инфекции — водный, меньшее значение имеют контактный и пищевой (кормовой).

В организм человека и животных лептоспиры проникают через незначительные повреждения кожи и неповрежденные слизистые оболочки полости рта, носа, глаз, желудочно — кишечного и мочеполового трактов.

Часть 4

Профилактика и борьба с лептоспирозом сельскохозяйственных и домашних животных

4.1. Основанием для подозрения на неблагополучие хозяйства по лептоспирозу служат клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, характерные для этой инфекции, обнаружение специфических антител в крови животных. Диагноз лептоспироза во всех случаях должен быть подтвержден лабораторными исследованиями.

4.2. В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА):

    — на племпредприятиях, станциях (пунктах) искусственного осеменения и в племенных хозяйствах (фермах) всех производителей два раза в год; — свиней, крупный и мелкий рогатый скот, лошадей — перед вводом (ввозом) и выводом для племенных и пользовательных целей (за исключением животных на откорм) поголовно; — во всех случаях при подозрении на лептоспироз.

4.3. По результатам лабораторных исследований хозяйство (ферму, отделение, предприятие, гурт и т.д.) считают неблагополучным по лептоспирозу в одном из следующих случаев:

    — культура лептоспир выделена из патологического материала; — лептоспиры обнаружены при микроскопическом исследовании патологического материала; — антитела обнаружены в сыворотке крови более, чем у 20% обследованных животных в титре 1:50 у невакцинированных, 1:100 и более — у вакцинированных. При выявлении меньшего числа положительных реакций проводят микроскопию мочи. При отрицательном результате микроскопии мочи повторное исследование сыворотки крови и мочи ранее исследованных животных проводят через 15-30 дней.

Обнаружение лептоспир или антител при повторном исследовании у животных, не имевших их при предыдущем исследовании, или нарастание титра антител в четыре и более раз свидетельствует о неблагополучии хозяйства.

4.4. Лептоспироз считают причиной аборта (мертворождения) при обнаружении:

    — лептоспир в органах (тканях, жидкостях) плода или околоплодных водах; — антител к лептоспирам в сыворотке крови плода в РМА в разведении 1:5 (с антигеном 1:10) и более.

4.5. Лептоспироз считают причиной гибели животных при наличии клинических признаков и патологоанатомических изменений, характерных для этой инфекции, подтвержденных обнаружением лептоспир в крови или паренхиматозных органах (кроме почек).

4.6. В целях недопущения заболевания животных лептоспирозом собственники и владельцы скота, ветеринарные специалисты обязаны выполнять следующее:

    — осуществлять контроль за клиническим состоянием животных, учитывать количество абортов и при подозрении на лептоспироз отбирать патматериал для лабораторных исследований; — комплектование племенных хозяйств (ферм), предприятий, станций искусственного осеменения из благополучных по лептоспирозу хозяйств; — исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на лептоспироз в РМА в разведении сыворотки 1:25. Свиней, вводимых в хозяйство для племенных целей, обследуют, кроме того, на лептоспироносительство путем микроскопии мочи независимо от результатов серологических исследований. При выявлении животных, сыворотка крови которых содержит специфические антитела или выделяющих лептоспир с мочой, проводят мероприятия, предусмотренные для неблагополучных по лептоспирозу хозяйств; — разрешается комплектовать откормочные хозяйства (отделения, фермы) клинически здоровыми животными без обследования на лептоспироз, но с обязательной вакцинацией их против лептоспироза в период карантинирования; — не допускать контакта животных со скотом неблагополучных по лептоспирозу хозяйств (ферм), населенных пунктов, на пастбище, в местах водопоя и т.д.; не выпасать невакцинированных животных на территории природных очагов лептоспироза; — не устраивать летних лагерей для животных на берегах открытых водоемов; — систематически уничтожать грызунов в животноводческих помещениях, на территории ферм, в местах хранения кормов и т.п.

4.7. Животных, поступающих по импорту, содержат в карантинном помещении и исследуют их сыворотку крови в РМА с лептоспирами серологических групп, регистрируемыми в стране — экспортере.

При получении положительной РМА с сывороткой крови отдельных животных проводят микроскопию мочи и повторное исследование сыворотки крови через 7-10 дней у животных всей группы для решения вопроса о благополучии по лептоспирозу.

4.8. При установлении диагноза лептоспироз администрация района (города) по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяйства (его отдельной части), населенного пункта неблагополучным по лептоспирозу, вводит ограничения и утверждает план по оздоровлению хозяйства.

Одновременно главный ветеринарный врач района (города) сообщает об этом вышестоящему ветеринарному органу и территориальному центру госсанэпиднадзора.

В плане оздоровительных мероприятий предусматривают необходимые диагностические исследования животных, ограничительные, ветеринарные, санитарные, организационно — хозяйственные мероприятия с указанием сроков проведения и ответственных лиц.

4.9. По условиям ограничений запрещается:

    — выводить (ввозить) животных для целей воспроизводства, продавать животных населению; — перегруппировывать животных без ведома ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство; — допускать животных к воде открытых водоемов и использовать ее для поения и купания животных; — выпасать невакцинированных животных на пастбищах, где выпасались больные лептоспирозом животные, или на территории природного очага лептоспироза; — скармливать невакцинированным животным корма, в которых обнаружены инфицированные лептоспирами грызуны.

4.10. Молоко, полученное от больных лептоспирозом животных, нагревают до кипения и используют в корм. Молоко клинически здоровых коров, сыворотка крови которых дает положительную РМА без нарастания титра, используют без ограничений.

4.11. В неблагополучном по лептоспирозу хозяйстве (ферме, отделении, стаде, свинарнике, и т.д.) проводят клинический осмотр и измерение температуры тела у подозрительных по заболеванию животных.

Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунной сывороткой и антибиотиками в дозах, указанных в наставлениях по их применению.

Убой таких животных проводят на санитарной бойне, а при ее отсутствии — в убойном цехе мясокомбината в конце смены, после удаления продуктов убоя здоровых животных, с соблюдением мер личной профилактики. Помещение и оборудование после убоя таких животных дезинфицируют. Продукты убоя используют в соответствии с «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно — санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов».

4.12. Клинически здоровых животных всех видов и возрастных групп, восприимчивых к лептоспирозу, вакцинируют. Животных, подвергнутых лечению, вакцинируют через 5-7 дней после выздоровления.

4.13. Всех животных откормочных хозяйств, неблагополучных по лептоспирозу, и малоценных животных в племенных и пользовательных хозяйствах откармливают и сдают на убой.

Маточное поголовье, производителей и ремонтный молодняк, которых необходимо сохранить для воспроизводства, после вакцинации обрабатывают лептоспироцидными препаратами и переводят в продезинфицированное помещение.

Эффективность обработки проверяют через 10-15 дней путем микроскопии мочи.

4.14. Молодняк, полученный после проведения мероприятий, выращивают отдельно, вакцинируют в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины против лептоспироза и, после снятия ограничений, реализуют на общих основаниях.

4.15. Вывод животных для откорма разрешается в пределах области (края, республики) через месяц после последнего случая выздоровления больного животного, проведения вакцинации и заключительных ветеринарно — санитарных мероприятий.

4.16. У производителей (быки, хряки, жеребцы, бараны), инфицированных лептоспирами (положительная РМА, лептоспиры в моче), прекращают получать сперму и, исходя из хозяйственной целесообразности, направляют их на убой или обрабатывают стрептомицином и проводят дезинфекцию помещения. Все поголовье вакцинируют против лептоспироза. Через 10-15 дней эффективность лечения контролируют путем микроскопии мочи. При обнаружении лептоспир в моче повторяют курс лечения и проверку его эффективности. От быков, признанных здоровыми, продолжают брать сперму. Сперму, полученную от быков — лептоспироносителей, уничтожают.

4.17. Повторное исследование сыворотки крови в РМА и микроскопию мочи всех производителей на ранее неблагополучном по лептоспирозу предприятии (станции) проводят через 3 месяца и при получении отрицательных результатов далее каждые 6 месяцев.

Производителей на предприятиях (станциях, пунктах) искусственного осеменения, расположенных в неблагополучной или угрожаемой по лептоспирозу зоне, вакцинируют против лептоспироза.

4.18. В питомниках служебного собаководства изолируют клинически больных и подозрительных по заболеванию собак, лечат их гипериммунной сывороткой и стрептомицином.

Клинически здоровых собак всех возрастных групп вакцинируют против лептоспироза.

Продажа собак из неблагополучного по лептоспирозу питомника запрещается.

Владельцы собак обязаны обеспечить проведение вакцинации против лептоспироза.

4.19. Ограничения в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах снимают в следующем порядке:

    — в откормочных хозяйствах — после сдачи поголовья на убой и проведения заключительных ветеринарно — санитарных мероприятий; — в племенных и пользовательных хозяйствах — после установления их благополучия по лептоспирозу лабораторными методами исследований. Для этой цели через 1-2 месяца после проведения мероприятий исследуют в РМА не менее 50 проб сыворотки крови молодняка, предназначенного для продажи (не должно быть положительных реакций), и не менее 100 проб мочи от каждой 1000 взрослых животных или группы ремонта, среди которых не должно быть лептоспироносителей; РМА у взрослых животных может оставаться положительной; — повторное исследование на лептоспироз в ранее неблагополучных хозяйствах проводят через 6 месяцев после снятия ограничений; — хозяйство считают оздоровленным при получении отрицательных результатов исследований у всех обследованных животных.

4.20. Порядок ветеринарной обработки племенных и пользовательных животных, выводимых из хозяйств.

4.21. Вывод животных для племенных или пользовательных целей разрешается только из благополучных по лептоспирозу хозяйств (ферм, отделений).

4.22. Предназначенных к продаже животных содержат в карантине и исследуют сыворотку крови в РМА на лептоспироз, у свиней, кроме того, мочу на наличие лептоспир.

4.23. Вывод животных разрешается без ограничений при отрицательных результатах исследований по всей группе.

При выявлении у отдельных животных антител в крови или лептоспир в моче всю группу оставляют в хозяйстве и проводят дополнительные исследования для решения вопроса о его благополучии по лептоспирозу.

4.24. Вывод животных из хозяйств, в которых есть единичные (до 10%) животные с положительной РМА при отсутствии лептоспир в моче, разрешается внутри области (края, республики) по согласованию с ветотделом в хозяйства с аналогичной ситуацией по лептоспирозу после вакцинации и трехкратной обработки стрептомицином.

4.25. Специфическая иммунопрофилактика и антибиотикотерапия.

4.26. Вакцинируют против лептоспироза всех восприимчивых животных в следующих случаях:

    — в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах; — в откормочных хозяйствах, где поголовье комплектуют без обследования на лептоспироз; — при выпасании животных в зоне природного очага лептоспироза; — при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует в РМА; — в районах с отгонным животноводством.

В хозяйствах, неблагополучных по лептоспирозу и парвовирусной инфекции свиней, применяют ассоциированную вакцину, содержащую инактивированные антигены лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi и парвовирус.

Крупный рогатый скот по эпизоотическим показаниям вакцинируют ассоциированными вакцинами против лептоспироза и эмфизематозного карбункула, против лептоспироза и кампилобактериоза.

Собак вакцинируют вакциной против лептоспироза собак или ассоциированной вакциной против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак (Гексаканивак).

Часть 5

Профилактика заболеваний людей на территории эпизоотического очага

5.1. Организационно — методическое руководство работой по профилактике лептоспироза среди людей осуществляют отделы особоопасных инфекций республиканских, краевых и областных центров Госсанэпиднадзора.

5.2. О каждом больном и подозрительном по заболеванию лептоспирозом медицинским работником направляется в санитарно — эпидемиологическую станцию экстренное извещение (учетная форма N 058).

Заболевания лептоспирозом учитываются в журнале регистрации инфекционных заболеваний (учетная форма N 060).

Следует обязательно определять, к какой серогруппе относится возбудитель выявленного лептоспирозного заболевания.

5.3. При выявлении групповых заболеваний с числом заболевших 10 и более областные, краевые, республиканские центры госсанэпиднадзора немедленно информируют Комитет Госсанэпиднадзора РФ. Подробное донесение представляется в Комитет Госсанэпиднадзора РФ не позднее 1 месяца по окончании вспышки.

5.4. Все больные с клиническим диагнозом или подозреваемые в заражении лептоспирозом в обязательном порядке должны быть обследованы лабораторными методами в соответствии с «Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике лептоспироза» (МЗ РСФСР 07.12.87).

5.5. В случае появления больных лептоспирозом людей, а также больных животных и лептоспироносителей, врач — эпидемиолог совместно с ветеринарными специалистами проводит эпидемиологическое обследование.

5.6. Если предполагается, что источником заражения людей послужили сельскохозяйственные, промысловые и другие животные, Центр госсанэпиднадзора сообщает об этом ветеринарной службе, которая выясняет эпизоотическую ситуацию и по предложению главного санитарного врача города (района) проводит лабораторное обследование животных независимо от того, регистрировались ли ранее среди них какие-либо заболевания.

Если источником заражения людей явились сельскохозяйственные животные или собаки индивидуальных владельцев, по предложению Главного государственного врача лабораторно обследуются подозреваемые животные.

В случае, если предполагается, что инфицирование произошло от грызунов, то организуется их отлов и лабораторные обследования в подозреваемых хозяйствах, угодьях, населенных пунктах и выясняются возможные связи антропургического очага с природным.

На основании данных эпидемиологического обследования заполняется «Карта эпизоотолого — эпидемиологического обследования очага зоонозного заболевания» (ф. N 391/У).

5.7. При заболевании лептоспирозом связь заболевания с профессиональной деятельностью больного устанавливает врач — эпидемиолог территориального центра госсанэпиднадзора, проводящий эпидобследование в очаге заражения.

Основным документом, подтверждающим профессиональный характер заражения лептоспирозом, служит карта эпидемиологического обследования (ф. N 391/У с заполненным вкладным листом).

Мероприятия по профилактике и борьбе с лептоспирозом проводятся дифференцированно в очагах разных типов.

5.8. В очагах лептоспироза проводятся мероприятия в соответствии с инструктивно — методическими документами Госкомсанэпиднадзора РФ и Минсельхозпрода РФ.

5.9. При возникновении групповых заболеваний людей, в случае, если подозревается загрязнение водоема сельскохозяйственными животными, немедленно запрещается купание и использование воды для питья и хозяйственных нужд из этого водоема. Использование воды в последующем разрешается спустя 4 недели с момента устранения причин заражения водоемов. Подозрительная на заражение лептоспирами вода употребляется только после обеззараживания.

5.10. В очагах лептоспироза руководители хозяйств обязаны:

    — обеспечить всех работников животноводства спецодеждой и спецобувью, включая резиновые сапоги, халаты, прорезиненный фартук, нарукавники, перчатки, косынку; — обеспечить инструктаж обслуживающего персонала о мерах личной гигиены и промсанитарии при лептоспирозе; — иметь в каждом животноводческом помещении (скотном дворе, свинарнике и т.д.) умывальник, мыло, полотенце, аптечку первой помощи, емкости с дезраствором, а также помещение, оборудованное для хранения спецодежды и обуви; — иметь в хозяйстве санитарный журнал для записи указаний и предложений специалистов ветеринарно — санитарного надзора и органов здравоохранения, обеспечить выполнение сделанных указаний и предложений; — при выявлении заболевания лептоспирозом среди животных немедленно принять меры по предупреждению заражения людей, оказанию помощи по выявлению источников возбудителя инфекции.

5.11. Запрещается прием пищи, воды, курение во время работы. Для приема пищи отводится специальное помещение, где должны быть умывальник, 2%-ный раствор хлорамина и закрытые бачки с питьевой водой.

5.12. Обезвреживание сточных вод, текущую и заключительную дезинфекцию помещений, загонов, выгульных площадок, оборудования, инвентаря и других объектов проводят с использованием любых веществ, предназначенных для дезинфекции животноводческих помещений и объектов внешней среды, инфицированных патогенными неспоровыми микробами.

5.13. Если не установлено возможное место заражения заболевшего лептоспирозом, то при наличии грызунов по месту его жительства проводится дератизация и дезинфекция, как при кишечных инфекциях. Если известно, что заражение произошло вне дома, эти мероприятия проводятся не в домашнем очаге, а по месту заражения в зависимости от выявленного источника.

5.14. Для предупреждения распространения иктерогеморрагического лептоспироза, в наиболее заселенных крысами объектах проводятся дератизационные мероприятия. Они проводятся в жилых застройках, на животноводческих фермах, продовольственных складах, зверофермах, предприятиях по переработке животноводческого сырья и продуктов, в шахтах и канализационных сооружениях, а также в открытых стациях городов (свалки, пустыри, парковая зона) и сельской местности, местах массового отдыха, охоты и рыбной ловли (см. «Методические указания по борьбе с серой крысой в природных очагах иктерогеморрагического лептоспироза.» МЗ СССР. 1984).

5.15. Санитарные органы осуществляют контроль за проведением профилактических мероприятий по ограничению численности серой крысы: очисткой территории населенных пунктов от мусора, соблюдением санитарно — технических нормативов, относящихся к грызунонепроницаемости каптажей, колодцев и других водосборных сооружений, тары для хранения фуража и продуктов и т.д.

5.16. Все больные с явным заболеванием или подозрительные по заболеванию лептоспирозом в обязательном порядке подлежат немедленной госпитализации. Разобщение общавшихся с заболевшими не проводится. Карантин не устанавливается.

5.17. Лица, переболевшие лептоспирозом, подлежат диспансерному наблюдению в течение шести месяцев с обязательным клиническим обследованием окулистом, невропатологом и терапевтом (детей — педиатром) в первый месяц после перенесенного заболевания. В последующие месяцы диспансерные наблюдения осуществляются ежемесячно участковыми врачами с привлечением специалистов по профилю клинических проявлений.

Снятие с учета по истечении срока диспансерного наблюдения проводится при полном клиническом выздоровлении (нормализации лабораторных и клинических показателей). В противном случае сроки наблюдения удлиняются до полного выздоровления.

5.18. Профилактическая вакцинация против лептоспироза проводится населению по эпидемическим показаниям, определяемым местными органами здравоохранения в зависимости от эпидемической и эпизоотической ситуации.

5.19. В очагах лептоспироза иммунизируются лица повышенного риска инфицирования. Контингенты риска и время иммунизации определяются территориальными ЦГСН.

5.20. Плановой иммунизации подлежат сотрудники лабораторий, работающие с патогенными лептоспирами (в любое время года), а также лица, направляемые на строительные и сельскохозяйственные работы в места активно действующих природных и антропургических очагов лептоспироза (не позднее, чем за месяц до начала работы в них).

5.21. В целях экстренной антибиотикопрофилактики лептоспироза лицам, подвергшимся риску заражения, назначается доксициклин (вибрамицин) по следующей схеме: 1 капсула (0,1 г) один раз в день в течение 5 дней. Решение о проведении экстренной химиопрофилактики принимается территориальными ЦГСН.

5.22. В очагах лептоспироза медицинские и ветеринарные работники, руководители хозяйств проводят санитарно — просветительную работу среди населения о мерах профилактики данной инфекции.

Лептоспироз (leptospirosis) – инфекционное природно-очаговое заболевание животных и человека, которое проявляется кратковременной лихорадкой, анемией, гемоглобинурией, желтухой (кроме свиней), абортами, маститами, рождением слабого или мертвого приплода, геморрагическим диатезом, некрозом кожи и слизистых оболочек, атонией желудочно-кишечного тракта, иногда (у крупного рогатого скота) нервно-менингиальными явлениями.

Заболевание регистрируется во всех странах мира, в том числе и Республике Беларусь.
Экономический ущерб складывается из затрат на проведение обязательной вакцинации свиноматок в хозяйствах общественного сектора против лептоспироза; лечения; проведения диагностических исследований и мероприятий по профилактике и ликвидации болезни.

Этиология. Возбудитель заболевания относится к роду Leptospira. Патогенными для животных являются лептоспиры вида L. Interrogans. В настоящее время выделено более 200 сероваров лептоспир, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серогруппы. Они имеют вид тонких (7-14?0,06-0,15 мкм) серебристых нитей, которые совершают непрерывное колебательно-вращательное и наступательное движение.

Устойчивость лептоспир к дезинфицирующим средствам и высокой температуре небольшая, однако в водоемах и почве они сохраняются длительное время. Чувствительны к антибиотикам, особенно к стрептомицину.

Эпизоотологические данные. Восприимчивы все сельскохозяйственные животные. Чаще болеют лептоспирозом свиньи и крупный рогатый скот, особенно молодняк.

Источником возбудителя инфекции являются больные животные и лептоспироносители, носительство у крупного рогатого скота продолжается до 7, у свиней – до 23 мес. Грызуны могут быть пожизненными лептоспироносителями. Выделяется возбудитель во внешнюю среду преимущественно с мочой, реже с другими секретами и экскретами.

Факторами передачи являются контаминированные лептоспирами вода, корма, почва, подстилка и т.д.

Заражение происходит алиментарным путем, через повреждения кожи и слизистых оболочек, возможно внутриутробно, аэрогенно и половым путем.

Для лептоспироза крупного рогатого скота характерна сезонность – это теплое время года, когда роль водного фактора реализуется. У свиней сезонного проявления болезни не установлено.
Заболеванию свойственна стационарность и природная очаговость, которые обусловлены длительным лептоспироносительством домашними и дикими животными, особенно грызунами.
Заболевание протекает в виде энзоотий, летальность наибольшая у свиней и составляет до 45% и выше.

Патогенез. Возбудитель в организм проникает через поврежденные кожу и слизистые оболочки. Благодаря активному движению он быстро проникает в кровь, где интенсивно размножается с развитием бактериемии. Через 5-7 дней в сыворотке крови появляются антитела, которые разрушают лептоспир с высвобождением эндотоксинов. Под их действием разрушаются эритроциты, нарушается порозность сосудов, что приводит к развитию основных признаков болезни (анемия, желтуха, гемоглобинурия, аборты, геморрагический диатез, некроз кожи и др.) Смерть может наступать от сердечной недостаточности в результате анемии или уремии вследствие тяжелого поражения почек.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период от 3 до 20 дней. У крупного рогатого скота заболевание протекает чаще хронически и бессимптомно. У молодняка этого вида животных при остром течении температура тела повышается до 41,5° С, развивается анемия, затем желтуха, атония преджелудков, конъюнктивит, некрозы кожи, понос судороги, моча темно-красного цвета, через 12-48 часов животные, как правило, погибают. У коров наблюдаются аборты. При подостром и хроническом течении указанные признаки выражены слабее. В редких случаях болезнь может протекать сверхостро и характеризоваться лихорадкой, возбуждением, анемией, желтухой, гемоглобинурией 100% летальностью в течение 12-24 часов.

У свиней лептоспироз протекает хронически. У супоросных свиноматок заболевание проявляется массовыми абортами (в последней трети супоросности), рождением мертвых или нежизнеспособных поросят и развитием агалактии.

У поросят первых дней жизни (1-3 мес.) повышается температура тела до 41-41,5° С, появляется неуверенная походка, судороги, понос, иногда рвота, слезотечение, застойная гиперемия кожи в области ушей, живота, задних конечностей, хвоста. У некоторых имеет место некроз кончиков ушей и хвоста. Желтушность у свиней отсутствует.

У лошадей заболевание проявляется теми же симптомами, как и у жвачных. Кроме того, отмечают быструю утомляемость, дрожание конечностей, хромату и болезненность мышц.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии обнаруживают: желтуху (кроме свиней); некрозы кожи; нефрозо-нефрит: слабый геморрагический диатез; гемоглобинурию; неизмененную селезенку; зернистую дистрофию печени и миокарда.

Диагностика. Учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения.

Окончательно диагноз ставят на основании лабораторных методов исследования (микроскопический, серологический и гистологический).

Дифференциальная диагностика. Заболевание у крупного рогатого скота дифференцируют от бруцеллеза, пироплазмидозов, кампилобактериоза, хламидиоза и листериоза; у свиней – от репродуктивно-респираторного синдрома, парвовирусной инфекции, хламидиоза, бруцеллеза, колибактериоза; у лошадей – от инфекционного энцефаломиелита и инфекционной анемии.

Лечение. Эффективным средством при лептоспирозе является стрептомицин и некоторые другие антибиотики. Для специфического лечения применяют гипериммунную сыворотку.

Профилактика и меры борьбы. При установлении диагноза на лептоспироз вводят ограничения. Проводят клинический осмотр и выборочную термометрию. Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и лечат, а подозрительных в заражении – иммунизируют. Проводят текущую дезинфекцию. Молоко от больных и подозрительных по заболеванию кипятят и используют в корм животным. Хозяйство считают оздоровленным после проведения оздоровительных мероприятий, получения отрицательных результатов серологических исследований сыворотки крови и мочи животных.

НАЗНАЧЕНИЕ:

Применяют в хозяйствах, неблагополучных и угрожаемых по заболеванию лептоспирозом, при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует на лептоспироз в РМА или РА.

ОПИСАНИЕ:

Жидкость с серо-белым осадком, который при встряхивании легко разбивается в медленно оседающую гомогенную взвесь.

ХАРАКТЕРИСТИКА:

Вызывает выработку специфических антител, которые обеспечивают иммунитет против возбудителей лептоспироза. Иммунитет у животных наступает через 14-20 сут после введения вакцины и сохраняется не менее 6 месяцев.

ПРИМЕНЕНИЕ:

Вакцину вводят внутримышечно однократно (за исключением поросят в возрасте от 1 до 3 месяцев, которых вакцинируют двукратно) в следующих дозах:

Вид и возраст

животных

Дозы вакцины (см3)

Срок ревакцинации

(месяцы)

первичная вакцинация

ревакцинации

Свиньи:

1-3 месяца

от 3 до 10 мес

хряки и свиноматки

2+3 (с интервалом 12-15 дней)

ПЕРИОД ОЖИДАНИЯ:

Убой животных на мясо и использование молока для пищевых целей после введения сыворотки разрешается без ограничений.

ФОРМА ВЫПУСКА:

Стеклянные флаконы по 50, 100 и 200 см3.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ:

Хранят вакцину в упаковке изготовителя в защищенном от света месте при температуре от плюс 2 °С до плюс 15 °С. Срок годности вакцины 12 месяцев с даты изготовления при соблюдении условий хранения и транспортирования.

FILED UNDER : Справочник

Submit a Comment

Must be required * marked fields.

:*
:*